이 계산기는?
qPCR(정량적 중합효소연쇄반응) 효율성 계산기는 표준 곡선(Standard Curve)의 기울기를 이용하여 PCR 반응의 증폭 효율을 계산합니다.
이상적인 PCR 반응에서는 매 사이클마다 DNA가 2배로 증폭되어 효율이 100%가 됩니다. 하지만 실제 실험에서는 다양한 요인으로 인해 효율이 달라질 수 있습니다.
공식
Efficiency = (10^(-1/slope) - 1) × 100%
표준 곡선의 기울기가 -3.32일 때 효율이 정확히 100%입니다.
사용 공식:
(10 ^ (-1 / slope) - 1) * 100입력 변수 설명
표준 곡선 기울기 (Slope)
연속 희석된 표준 시료의 Ct 값을 log(농도)에 대해 플롯했을 때 얻어지는 직선의 기울기입니다. qPCR 분석 소프트웨어에서 자동으로 계산됩니다. 보통 -3.1 ~ -3.6 범위가 허용됩니다.
활용 예시
- 기울기 -3.32: 효율 = 100% (이상적인 증폭)
- 기울기 -3.1: 효율 ≈ 110% (과대 증폭, 비특이적 산물 가능성)
- 기울기 -3.6: 효율 ≈ 90% (저조한 증폭, 프라이머 최적화 필요)
💡 팁: 허용 가능한 효율 범위는 일반적으로 90-110%입니다. 이 범위를 벗어나면 프라이머 재설계, 어닐링 온도 조정, 템플릿 순도 확인이 필요합니다.
⚠️ 주의사항
- Master mix는 충분히 Vortexing하여 균일하게 섞어야 정확한 결과를 얻을 수 있습니다.
- 파이펫팅 오차가 효율 계산에 큰 영향을 미치므로, 각 희석 단계에서 팁을 교체하고 정확하게 분주하세요.
💡 자주 묻는 질문
Q효율이 100%를 넘는 건 무슨 의미인가요?
A
PCR 억제제(Inhibitor)가 있거나, 비특이적 증폭(Non-specific amplification)이 발생했거나, 파이펫팅 오류가 있을 수 있습니다. 특히 낮은 농도 구간에서 Primer dimer가 생기면 효율이 높게 측정될 수 있습니다.
Q효율이 너무 낮으면(90% 미만) 어떻게 해야 하나요?
A
프라이머 효율이 떨어지거나 어닐링 온도가 맞지 않을 수 있습니다. 프라이머를 다시 디자인하거나 온도를 최적화하세요. 템플릿 DNA의 순도(A260/280)도 점검해야 합니다.
Q기울기(Slope)가 -3.32가 기준인 이유는?
A
PCR은 1사이클마다 2배씩 증폭되므로, 로그 스케일에서 기울기는 log10(2)의 역수인 -1/log10(2) ≈ -3.32가 됩니다.
QR² 값은 얼마나 되어야 하나요?
A
표준 곡선의 선형성을 나타내는 R²(상관계수 제곱) 값은 최소 0.98 이상, 이상적으로는 0.99 이상이어야 신뢰할 수 있습니다.
왜 이 계산기가 필요한가요?
복잡한 수식을 직접 계산하는 것은 시간이 걸리고 실수가 발생하기 쉽습니다. LabMate의 결정론적 엔진은 검증된 알고리즘을 통해 0.0000000001의 오차도 없는 정확한 결과를 보장합니다.